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金巴利

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试剂
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金巴利

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一种用于钙活性历史成像的光转换蛋白

CaMPARI (钙调制光激活比率积分子) 是一种光转换蛋白结构物,能够在规定的时间窗内成像大量细胞的整合钙活性。

改进的CAMPARI 2.0可以找到这里

钙是许多细胞信号事件的重要调节因子,钙指标已被广泛用于成像和测量与神经活动相关的 Ca2 + 水平的变化。典型的基因编码钙指示剂 (GECI) 对 Ca2 + 浓度变化表现出快速反应,这提供了实时信息,但限制了对显微镜视野内区域的研究。在规定的时间窗口内监测更大细胞群和跟踪钙活性的互补方法将开启新的研究能力。

霍华德 · 休斯医学研究所 Janelia Research Campus 的发明者开发了一种新的光转换蛋白,能够对大面积和细胞群的钙活性历史进行成像。这种新的钙积分器是基于 EosFP,一种荧光蛋白,在紫外线 (~ 400 纳米) 照射下,其发射从绿色变为红色。通过工程库的 EosFP 变体,发明家们已经开发了一种蛋白质,只有当钙存在时,当 PC 光被应用时,这种蛋白质才会经历明显更快的绿色到红色的光转换 (PC)。这种永久转换记录了所有被 PC 光照射的区域的钙活性。红色荧光强度与钙活性相关,因此在 PC 定义的时间窗内整合总水平。优化的变体已经在培养的大鼠海马神经元中得到验证,可观察到 PC 为 10 个动作电位序列和 2 个 PC 暴露。进一步的改进将产生具有改进的对比度、亮度和响应动力学的变体。CaMPARI 通过测量大面积细胞和组织的总钙活性来补充现有的钙指标。

优点:

  • 在规定的时间窗口内的图像总钙活性 (由光转换光门控)
  • 不限于显微镜的视野,如在使用例如 GCaMP 的实时钙成像期间
  • 能够用培养细胞进行高通量钙测定

应用:

  • 跨大细胞和/或组织的钙活性成像
  • 在模型生物的刺激或行为过程中标记组织 (如大脑) 内的 “活性” 细胞
  • 基于钙活性水平的神经元追踪
  • 当靶向特定亚细胞位置时,亚细胞定位钙活性的整合

出版物:

神经回路。用设计的钙积分器标记体内活性神经回路。
Fosque BF,Sun Y,Dana H,Yang CT,Ohyama T,Tadross MR,Patel R,Zlatic M,Kim DS,Ahrens MB,Jayaraman V,Looger LL,Schreiter ER Science.2015 2月13日; 第 347 (6223): 755-60。Doi: 10.1126/science.1260922.

专利状态:

已发布的美国专利9,518,99610,067,148

机会:

CaMPARI 的变体和包装可在维金生物科学,可用于非营利研究添加基因,佩恩矢量,并可获得商业许可证。Janelia 可能提供了最新的变体。

查询请参考:

Janelia 2013-016

质粒可从Addgene.org:

名称 Addgene 质粒 ID 基准

PcDNA3-CaMPARI

60421

Fosque 等人,2015

V398D pcDNA3-CaMPARI

60786

Fosque 等人,2015

W391F V398L pcDNA3-CaMPARI

60787

Fosque 等人,2015

PAAV_hsyn_NES-his-CaMPARI2-WPRE-SV40

101060

Moeyaert 等人,2018

PAAV_hsyn_NES-his-CaMPARI2-F391W-WPRE-SV40

101061

Moeyaert 等人,2018

PAAV_hsyn_NES-his-CaMPARI2-H396K-WPRE-SV40

101062

Moeyaert 等人,2018

PAAV_hsyn_NES-his-CaMPARI2-F391W-G395D-WPRE-SV40

101063

Moeyaert 等人,2018

PAAV_hsyn_NES-his-CaMPARI2-L398T-WPRE-SV40

101064

Moeyaert 等人,2018

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钙调制光激活比率积分器
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